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        技術專欄

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        Norgen Biotek細胞質RNA和細胞核RNA實驗操作指南

        發布者:艾美捷科技    發布時間:2021-12-17     
        分享到:

        Norgen Biotek中國區獨家總代理——艾美捷科技

        細胞質和細胞核RNA提取試劑盒

        Cytoplasmic & Nuclear RNA Purification Kit

         

        貨號:21000

        懸浮細胞和被提起懸浮的細胞(For cells growing in suspension and lifted cells)

         

        00:00~00:56

        • 您好,您正在收看Norgen Biotek。今天,我們將提供有關細胞質和細胞核RNA純化試劑盒(產品貨號:21000)的分步工作流程的教程,該教程適用于在懸浮細胞和被提起懸浮的細胞。

        • 為了避免樣品污染,建議在開始前先用1%的漂白劑消毒工作區域和儀器,然后70%乙醇擦拭。

        • 您的試劑盒包括:詳細的產品說明書,Lysis Buffer J(裂解緩沖液J),Buffer SK(緩沖液SK),Wash Solution A(洗滌液A),Elution Buffer E(洗脫液E),Spin Columns(離心柱),Collection Tubes(收集管)和1.7 mL Elution tubes(1.7 mL洗脫管)。

        • 在開始前,確保把Lysis Buffer J放在-20℃的冰箱中10到15分鐘,并在使用前取出。這是為了確保細胞質和細胞核RNA的分離。


        00:58

        1步:細胞組分的制備

        Step 1: Cell Fractions Preparation


        01:02~02:55

        1. 將細胞懸液轉移至無RNase的試管,并以不超過200 g或2000 RPM的速度離心10分鐘以沉淀細胞。01:16~01:23

        2. 小心倒出上清液。為了確保沉淀物不會脫落,可能會在沉淀物中留下幾微升的培養基。

        3. 在沉淀中加入200 uL冰冷的Lysis Buffer J。

        4. 通過渦旋15秒來裂解細胞。在進行下一步之前,請確保整個沉淀完全溶解。使用移液器將裂解液轉移至無RNase的微量離心管。

        5. 在臺式離心機中以最大速度旋轉裂解液10分鐘。

        6. 使用帶有小槍頭的移液器,將包含細胞質RNA的上清液轉移至另一個無RNase的試管。

        7. 細胞核RNA組分(沉淀)非常粘稠,可能很松散,因此,強烈建議使用較小的移液器槍頭來轉移細胞質部分,避免將細胞核RNA組分(沉淀)移出或轉移到細胞質部分中。

        8. 如果需要提取細胞核RNA,則保留含有細胞核RNA的沉淀。

        9. 為了確保沉淀微球不被移出,可以在沉淀物中留下幾微升的Lysis Buffer J。立即繼續執行步驟2。


        02:58

        第2A步:將細胞質RNA與柱結合

        Step 2A: Binding Cytoplasmic RNA to Column

         

        03:02~03:43

        1. 向前一步的上清液(細胞質RNA組分)中加入200 ?L Buffer SK。渦旋混合10秒鐘。

        2. 向混合物中加入200 uL 96-100%乙醇。渦旋混合10秒鐘。

        3. 將混合物加到已與收集管組裝在一起的離心柱上,并以3500 g或6000 RPM離心1分鐘。

        4. 丟棄流通液,重新組裝離心柱及其收集管。


        03:45

        第2B步:將細胞核RNA與柱結合

        Step 2B: Binding Nuclear RNA to Column

         

        03:48~04:27

        1. 將400 uL Buffer SK添加到沉淀(細胞核RNA組分)中。渦旋混合10秒鐘。

        2. 向混合物中加入200 uL 96-100%乙醇。渦旋混合10秒鐘。

        3. 將混合物加到已與收集管組裝在一起的第二個離心柱上,并以3500 g或6000 RPM離心1分鐘。

        4. 丟棄流通液,重新組裝離心柱及其收集管。


        04:29

        第3步:柱洗

        Step 3: Column Wash

         

        04:32~05:04

        1. 將400μL Wash Solution A加入離心柱并離心1分鐘。

        2. 丟棄流通液。重復這一步驟兩次,總共洗三次。

        3. 旋轉離心柱2分鐘,以徹底干燥樹脂。丟棄收集管。


        05:06

        第4步:RNA洗脫

        Step 4: RNA Elution

         

        05:08~05:33

        1. 將離心柱放入試劑盒中提供的新的1.7 mL洗脫管中。將50 uL Elution Buffer E加到離心柱中。

        2. 以200 g或2000 RPM離心2分鐘,然后以14000 g或14000 RPM離心1分鐘。


        05:36

        第5步:RNA的保存

        Step 5: Storage of RNA

         

        05:39~05:49

        純化的RNA樣品可以在–20°C下保存幾天。建議樣品應置于–70°C進行長期保存。


        感謝您觀看本教程,希望這個操作指南能夠幫助到大家,如果你喜歡這個視頻,歡迎大家踴躍分享它。

         

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